無(wú)菌試驗(yàn)是什么？

無(wú)菌試驗(yàn)（Sterility test）是一種微生物檢驗(yàn)方法，用以確認(rèn)規(guī)范應(yīng)為無(wú)菌的產(chǎn)品是否受到微生物污染，常見(jiàn)于醫(yī)藥、生物科技、醫(yī)療器材制造等領(lǐng)域。

無(wú)菌試驗(yàn)的目的

無(wú)菌試驗(yàn)適用于絕大多數(shù)規(guī)定為無(wú)菌的醫(yī)藥產(chǎn)品，如注射劑、眼藥水、固體藥物、各式無(wú)菌醫(yī)材等，應(yīng)用的產(chǎn)品范圍非常廣泛。

如果這些產(chǎn)品受到微生物污染，在接觸人體后可能導(dǎo)致藥效降低，甚至引發(fā)感染和其他嚴(yán)重并發(fā)癥。 因此，無(wú)菌試驗(yàn)的主要目標(biāo)是保障規(guī)定為無(wú)菌的藥品、醫(yī)療器材在經(jīng)過(guò)無(wú)菌制程（Aseptic manufacturing）、*終滅菌（Terminal sterilization）等出廠前作業(yè)流程后，不存在活體微生物，使其在臨床使用上不會(huì)影響藥效或是造成感染。

無(wú)菌的定義與國(guó)際規(guī)范

無(wú)菌的定義

無(wú)菌是指樣品中不含活體微生物，為保障醫(yī)藥產(chǎn)品安全性的基礎(chǔ)要求。 國(guó)際上常以「無(wú)菌保證程度（Sterility Assurance Level， SAL）」作為滅菌確效的基準(zhǔn)，若SAL ≤ 10-6（樣品殘存的微生物污染機(jī)率小于等于百萬(wàn)分之一）即符合無(wú)菌要求。

無(wú)菌試驗(yàn)的國(guó)際規(guī)范

國(guó)際規(guī)范如ISO 11737-2、美國(guó)藥典（USP <71>）、歐洲藥典（EP）、日本藥典（JP）、中華藥典等技術(shù)規(guī)范中，均明文要求無(wú)菌試驗(yàn)的檢驗(yàn)環(huán)境、樣品制備與作流程，確保產(chǎn)品的無(wú)菌試驗(yàn)方式符合全球性的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，也為試驗(yàn)結(jié)果的可靠性提供保障。

無(wú)菌試驗(yàn)怎么做？

常見(jiàn)的無(wú)菌試驗(yàn)方法有兩種，分別是「微孔濾膜過(guò)濾法（Membrane Filtration Method）」和「直接接種法（Direct Inoculation Method）」。 根據(jù)國(guó)際醫(yī)藥品稽查協(xié)約組織（PIC/S）的規(guī)范，微孔濾膜過(guò)濾法和直接接種法皆需要在B級(jí)以上的無(wú)菌無(wú)塵室內(nèi)之A級(jí)無(wú)菌作臺(tái)進(jìn)行，作前可依據(jù)樣品特性選擇適合的作方法。

無(wú)菌試驗(yàn)方法一：微孔濾膜過(guò)濾法

微孔濾膜過(guò)濾法是目前無(wú)菌試驗(yàn)*常用的方法之一，適合液體樣品、固體樣品、具管線的醫(yī)療器材等可沖洗、使用濾膜過(guò)濾的樣品。

微孔濾膜過(guò)濾法的原理是將樣品利用孔徑小于0.45um的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，攔截可能存在的微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，檢測(cè)樣品中是否有活體微生物的存在。

微孔濾膜過(guò)濾法所需設(shè)備

微孔濾膜過(guò)濾法所需設(shè)備通常包含真空泵、過(guò)濾座與濾膜。 若選用可重復(fù)使用之不銹鋼過(guò)濾杯，除了可以高溫高壓滅菌 （autoclave） 之外，也可以搭配本生燈進(jìn)行火焰滅菌，有效節(jié)省滅菌時(shí)間。

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微孔濾膜過(guò)濾法作流程

微孔濾膜過(guò)濾法的作流程大致可分為四階段：樣品預(yù)處理、樣品過(guò)濾、濾膜培養(yǎng)和結(jié)果判定，以下將依序說(shuō)明。

1.樣品預(yù)處理：依據(jù)樣品的性質(zhì)，進(jìn)行微孔濾膜過(guò)濾法前需先做不同的預(yù)處理，處理方式可參考下表。

2.樣品過(guò)濾：將預(yù)處理好的樣品倒入過(guò)濾杯內(nèi)，啟動(dòng)真空泵產(chǎn)生負(fù)壓，將樣品通過(guò)濾膜過(guò)濾。 若樣品數(shù)量較多，可采用多連過(guò)濾座。

3.濾膜培養(yǎng)：過(guò)濾完成后，使用無(wú)菌鑷子將濾膜轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中密封，并置于培養(yǎng)箱用適當(dāng)溫度培養(yǎng)14日以上。

4.結(jié)果判定：觀察培養(yǎng)基是否變得混濁，以判斷是否有微生物生長(zhǎng)。 若培養(yǎng)基沒(méi)有變化，表示無(wú)微生物生長(zhǎng)，判定為符合無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)定; 若培養(yǎng)基變得混濁，則表示樣品中有活體微生物，則判定為不符合無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)定。

無(wú)菌試驗(yàn)方法二：直接接種法

直接接種法是針對(duì)不適合使用濾膜過(guò)濾的樣品而設(shè)計(jì)的無(wú)菌試驗(yàn)方法，例如無(wú)法過(guò)濾的溶液、無(wú)法溶解的固體或醫(yī)療器材等。 直接接種法直接將待測(cè)樣品置入適當(dāng)培養(yǎng)基中，藉由觀察培養(yǎng)基中微生物的生長(zhǎng)狀況來(lái)判定樣品的無(wú)菌性。

直接接種法作流程

直接接種法的作流程大致可分為三階段：樣品預(yù)處理、培養(yǎng)基培養(yǎng)和結(jié)果判定，以下將依序說(shuō)明。

1.樣品準(zhǔn)備：將樣品準(zhǔn)備完成后，放入培養(yǎng)基內(nèi)。

2.培養(yǎng)基培養(yǎng)：將培養(yǎng)基密封放入培養(yǎng)箱，并于適當(dāng)溫度培養(yǎng)14天以上。

3.結(jié)果判定：觀察培養(yǎng)基是否變得混濁，以判斷是否有微生物生長(zhǎng)，并記錄結(jié)果。 若培養(yǎng)基沒(méi)有變化，表示無(wú)微生物生長(zhǎng)，判定為符合無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)定; 若培養(yǎng)基變得混濁，則表示樣品中有活體微生物，則判定為不符合無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)定。

無(wú)菌試驗(yàn)方法比較：微孔濾膜過(guò)濾法與直接接種法

微孔濾膜過(guò)濾法與直接接種法兩種無(wú)菌試驗(yàn)方法各有其適用范圍與優(yōu)勢(shì)，進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)樣品特性選擇合適的方法，以確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。

無(wú)菌試驗(yàn)方法總結(jié)

無(wú)菌試驗(yàn)是醫(yī)藥與生技領(lǐng)域不可或缺的重要微生物檢測(cè)手段，透過(guò)微孔濾膜過(guò)濾法與直接接種法，能有效檢測(cè)產(chǎn)品是否受到微生物污染，進(jìn)而保障藥品與醫(yī)療器材的穩(wěn)定與使用的安全性！

附錄：微孔濾膜過(guò)濾法的真空過(guò)濾設(shè)備選擇

利用微孔濾膜過(guò)濾法進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)前，需選擇可靠的過(guò)濾設(shè)備。 真空過(guò)濾系統(tǒng)是一種高效且經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)室過(guò)濾設(shè)備，能滿足各類樣品的過(guò)濾需求。

真空過(guò)濾系統(tǒng)的組合內(nèi)含：真空泵（或直接排水式抽水泵）、過(guò)濾座（三連座、六連座或十二連座）、濾膜，以及火焰滅菌本生燈，您可以依據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，自由搭配*適合的組合。

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